【الاستخدام المقصود】

المجموعة عبارة عن مسبار TaqMan في الوقت الحقيقي الفلوريسنت PCR للكشف نوعيًا عن ORF1ab ، والحمض النووي للجينات N لـ 2019-nCoV في مسحة الحلق ، والبلغم في المرضى الذين يشتبه في ظهور أعراض الالتهاب الرئوي وحالات التكتل.

نتائج الاختبار هي للإشارة السريرية فقط ولا يمكن اعتبارها معيارًا للتشخيص السريري فقط. يوصى بإجراء تحليل واضح فيما يتعلق بالأعراض السريرية والنتائج المعملية الأخرى.

يجب أن يكون لدى المشغلين خبرة في التدريب المهني في مجال تضخيم الجينات أو اختبار طريقة البيولوجيا الجزيئية ، وأن يكون لديهم المؤهلات ذات الصلة للعمليات المختبرية. يجب أن يكون لدى المختبر احتياطات السلامة البيولوجية وإجراءات الحماية المعقولة.

【مبدأ الاختبار】

في هذه المجموعة ، تم تصميم الاشعال والتحقيقات للمناطق المحفوظة والمحددة من ORF1ab ، N of 2019-nCoV ، على التوالي. يستخدم الفلورسنت PCR للكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي بعد تنقية الحمض النووي لعينة الحمض النووي الريبي.

تستخدم مجموعة الاختبار هذه تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الفلوري في الوقت الحقيقي ، وخلال تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل ، يرتبط المسبار بالقالب ، ويتم شق مجموعة المراسلين 5'-end من المسبار بواسطة إنزيم Taq (5 '→ 3' نشاط نوكلياز خارجي) ، وبالتالي الابتعاد عن مجموعة التبريد لتوليد إشارة الفلورسنت. يتم رسم منحنى التضخيم في الوقت الفعلي تلقائيًا بناءً على إشارة التألق المكتشفة ، ويتم حساب قيمة العينة Ct (عدد الدورات التي حدثت عندما تصل إشارة التألق في كل أنبوب رد فعل إلى الحد المستقر). يتم استخدام FAM و VIC و Texas red fluorophores لتمييز الجين ORF1ab ، تحقيقات الجين N في محلول التفاعل. باستخدام اختبار واحد ، يمكن إجراء الكشف النوعي عن الجينين المذكورين أعلاه من 2019-nCoV في وقت واحد.

لتجنب النتيجة السلبية الخاطئة ، يتم تزويد المجموعة برقابة داخلية (IC) ، والتي تم تمييزها بمجموعة الفلورسنت Cy5 والتي يمكن استخدامها لمراقبة إجراء الاستخراج ومحلول التفاعل.

【المكونات الرئيسية】

ملحوظة¹: لا يمكن استبدال الكثير من المكونات.

ملحوظة²: لا تحتوي مجموعة الاختبار على كاشف استخراج الحمض النووي ، يرجى تحضير الكاشف قبل الاستخدام.

1. معالجة العينة

إضافة 10 ميكرولتر من التحكم الداخلي إلى 200 ميكرولتر من التحكم الإيجابي والسيطرة السلبية ، على التوالي فيما يتعلق بأداء استخراج الحمض النووي.

2. تحضير الكاشف:

إعداد النظام: خذ مجفد تضخيم الحمض النووي المثبت مسبقًا ، والذي يليه فتح كيس الرقائق وجهاز الطرد المركزي على الفور. يجب أن تكون كمية العينة لكل اختبار مضاعفات 8 تحتوي على تحكم إيجابي واحد والتحكم السلبي. أضف 35 ميكرولتر من الماء الخالي من نوكلياز إلى كل أنبوب تفاعل.

3. تحميل عينة:

أضف 5 ميكرولتر عينة من الحمض النووي المراد اختبارها ، والتحكم الإيجابي ، والتحكم السلبي في أن حجم التفاعل بالكامل هو 40 ميكرولتر في محلول التفاعل المخصص. لأنه لا يتطلب خليطًا دقيقًا ، وأغلق غطاء أنبوب تفاعل PCR ، والطرد المركزي السائل في جدار الأنبوب على قاع الأنبوب ، وبالتالي معالجة تضخيم PCR.

بعد التحقق ، تشير التقديرات إلى أن إضافة 5 ميكرولتر إلى 10 ميكرولتر من زيت البارافين في نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل لن يؤثر على نتيجة تفاعل البوليميراز المتسلسل ولكنه يتجنب التلوث وتبخر السائل.